A kívánt mikrobiális tudás
A mikroorganizmusok a természetben széles körben előforduló, szabad szemmel láthatatlan apró organizmusok csoportja, amelyeket optikai mikroszkóp vagy elektronmikroszkóp segítségével száz-, ezer- vagy akár tízezerszeresre kell nagyítani. Előnyük a kis méret, az egyszerű szerkezet, a gyors szaporodás, a könnyű variálhatóság és a környezethez való erős alkalmazkodási képesség.
A mikroorganizmusok osztályozása:
Sokféle mikroorganizmus létezik, legalább több mint 100,000 fajta. Szerkezetük, kémiai összetételük és életmódjuk és egyéb különbségeik szerint három kategóriába sorolhatók.
Az eukarióta mikrobiális sejtmag nagyobb fokú differenciálódást mutat, beleértve a magmembránt, a sejtmagot és a kromoszómákat; a citoplazma teljes organellumokkal rendelkezik (például endoplazmatikus retikulum, riboszóma és mitokondrium stb.). A gombák az ilyen típusú mikroorganizmusokhoz tartoznak.
A prokarióta mikrobiális sejtek nukleáris differenciálódása alacsony, csak primitív nukleoplazma, nincs magmembrán és sejtmag; az organellumok nem túl teljesek. Számos ilyen mikroorganizmus létezik, köztük baktériumok, spirocheták, mikoplazmák, rickettsia, chlamydia és actinomycetes.
Az acelluláris mikroorganizmusok nem rendelkeznek tipikus sejtszerkezettel és energiát termelő enzimrendszerrel, és csak élő sejtekben tudnak növekedni és szaporodni. A vírusok az ilyen típusú mikroorganizmusokhoz tartoznak.
Mikroorganizmusok szétválasztása és tisztítása
Az egynél több fajt tartalmazó mikrobiális tenyészetet kevert kultúrának nevezzük. Ha egy telep minden sejtje egyetlen szülősejtből származik, akkor a telepet tiszta tenyészetnek nevezzük. A baktériumfajok azonosítása során a felhasznált mikroorganizmusoknak általában tiszta kultúráknak kell lenniük. A tiszta tenyészet megszerzésének folyamatát elválasztásnak és tisztításnak nevezik, és számos módszer létezik.
1. Pour plate módszer
Először a mikrobaszuszpenziót sorozatban hígítjuk, és a hígítás egy bizonyos mennyiségét teljesen összekeverjük az oldott táptalajjal, körülbelül 40-50 fokon tartva, majd a keveréket steril Petri-csészébe öntjük. Megszilárdulás után a lemezt fejjel lefelé egy állandó kamrában inkubáltuk. Egyetlen sejtet megszaporítunk, hogy kolóniát hozzunk létre, egyetlen telepből szuszpenziót készítünk, és a fenti lépéseket többször megismételjük, hogy tiszta tenyészetet kapjunk.
2. Bevonat síklemez módszer
Először a mikrobaszuszpenziót megfelelően hígítjuk, majd a hígítás meghatározott mennyiségét steril tápagarlemezre helyezzük, amely megszilárdult, majd a hígítást steril üveglapáttal egyenletesen eloszlatjuk a táptalaj felületén. Állandó hőmérsékleten történő inkubálással egyetlen telep nyerhető.
3. Lemezírási módszer
A mikroorganizmusok elkülönítésének legegyszerűbb módja a csíkozás. Steril hurok segítségével kis mennyiségű tenyészetet csíkozzon a lemezre. Számos módszer létezik a felírásra. Az elterjedt írásmódok, amelyek nagyobb valószínűséggel jelennek meg egyetlen telepként, a perjel módszer, a görbe módszer, a négyzetes módszer, a sugárzási módszer és a négyrácsos módszer. Amikor az oltóhurok hátrafelé mozog a táptalaj felületén, az oltóhurkon lévő baktériumfolyadék fokozatosan felhígul, végül egyetlen sejt szóródik a megrajzolt vonalon. A tenyésztés után minden sejt kolóniává nő.
4. Dúsító tenyésztési módszer
A dúsító tenyésztés módszere és elve nagyon egyszerű. Olyan körülményeket teremthetünk, amelyek csak a kívánt mikrobák szaporodását teszik lehetővé, és ilyen körülmények között a kívánt mikrobák hatékonyan versenyezhetnek más mikrobákkal, és növekedési képességüket tekintve messze felülmúlják a többi mikrobát. Ha néhány kötelező parazitát kell izolálni, a mintákat be kell oltani a megfelelő fogékony gazdasejt-populációkba, hogy nagy számban növekedjenek. Tiszta parazita baktériumok nyerhetők ismételt oltással.
5. Anaerob módszer
A laboratóriumban egyes anaerob baktériumok izolálására az eredeti táptalajt tartalmazó kémcső használható tenyészedényként, és a kémcső forrásban lévő vízfürdőben több percig melegíthető, hogy a tápközegben lévő oldott oxigént kiszorítsuk. . Ezután gyorsan lehűtjük és beoltjuk. Az oltás után steril paraffint adtunk a táptalaj felületéhez, hogy a táptalajt a levegőtől elkülönítsük. Egy másik módszer az, hogy a közegben lévő gázt oltás után N2-re vagy CO2-ra cserélik, majd a kémcső száját láng felett lezárják. Néha egyes anaerob baktériumok hatékonyabb izolálása érdekében az izolált mintát a táptalajra lehet oltani, majd a Petri-csészét egy teljesen lezárt anaerob tenyésztő berendezésbe lehet helyezni.
6. Egysejtű (vagy egyspóra) izolálási módszer
Mikroszeparációs módszert kell alkalmazni az egyes sejtek vagy egyedi egyedek közvetlen izolálására vegyes populációkból a tenyésztéshez, hogy tiszta tenyészetet kapjunk. Nagyobb mikroorganizmusok esetén egyetlen egyed is kivonható kapilláris segítségével. Viszonylag kis egyedszámú mikroorganizmusok esetében mikromanipulátor szükséges, hogy a tiszta tenyészet eléréséhez kapilláris vagy mikrotű, horog, hurok stb. Az egycellás elválasztási módszer viszonylag magas követelményeket támaszt az üzemeltetési technológiával szemben.
Mikrobatenyésztés
1. Aszerint, hogy szükség van-e oxigénre a tenyésztés során, két kategóriába sorolható: aerob kultúra és anaerob tenyésztés.
Aerob kultúra: más néven "aerob kultúra". Azaz, amikor ezt a mikroorganizmust tenyésztik, oxigént kell hozzáadni, különben nem fog jól fejlődni. A laboratóriumban a ferde tenyészeteket úgy nyerik, hogy kívülről steril levegőt nyernek vattadugókon keresztül. Az Erlenmeyer-lombikban lévő folyékony tenyészet nagy részét rázógéppel felrázzák, így a külső levegő folyamatosan bejuthat a palackba.
Anaerob kultúra: Más néven "anaerob kultúra". Az ilyen mikroorganizmusok nem igényelnek oxigént a tenyésztésben való részvételhez. Az anaerob mikroorganizmusok tenyésztésének folyamatában a legfontosabb szempont a táptalaj oxigénjének eltávolítása.
2. A táptalaj fizikai állapota szerint két kategóriába sorolható: szilárd tenyészet és folyékony tenyészet.
Szilárd tenyésztés: Ez a módszer a törzsek laza és tápanyagban gazdag szilárd táptalajba történő beoltására, valamint a mikroorganizmusok megfelelő körülmények közötti tenyésztésére.
Folyékony tenyészet: Kísérletek során a folyékony tenyészet segítségével a mikroorganizmusok gyorsan szaporodnak, és nagyszámú tenyészet nyerhető. Bizonyos feltételek mellett a mikroorganizmusok számára is hatékony módszer a baktériumok kiválasztására és gazdagítására.
A BKMAM biotech megfelelő laboratóriumi fogyóeszközöket biztosít a mikrobatenyészethez:
Eldobható műanyag kerek/négyzet alakú Petri-csészék:
lNagy átlátszóságú polisztirol anyag (PS);
lA felület sima és lapos, és nincs optikai torzulás a sejteken mikroszkópos megfigyelés alatt;
l A halmozási kialakítás megkönnyíti a halmozást és tárolást;
l etilén-oxidos sterilizálás (EO);
l Kopás- és korrózióállóság.
Eldobható műanyag oltópálca/hurok:
polisztirol anyag (PS);
Szennyezés-, endotoxin-, DNS-, RNáz- és pirogénmentes;
A független csomagolást sterilizáltuk;
Finom kidolgozás és teljes specifikáció;
Eldobható műanyag sejtszóró, baktérium szóró:
polisztirol anyag (PS);
Szennyezés-, endotoxin-, DNS-, RNáz- és pirogénmentes;
L-alakú kialakítás, könnyen használható;
Egyszeri használat, könnyű és kényelmes.
Rozsdamentes acél/eldobható steril adatlapok:
A rozsdamentes acél adattábla rozsdamentes acélból, az eldobható adattábla élelmiszer-minőségű polipropilénből (PP) készült.
Szennyezés-, endotoxin-, DNS-, RNáz- és pirogénmentes;
A kenési terület szigorúan szabványosított
Az adattábla egyik oldala fogantyúval van ellátva, amely könnyen kezelhető
Steril, lezárt egycsomagolás a mintavétel másodlagos szennyeződésének és az eredmények hibájának elkerülése érdekében
Egyszeri használat a keresztszennyeződés elkerülése és a munkaterhelés csökkentése érdekében
Üdvözöljük, hogy együttműködjön velünk
Tisztelettel
Michael Peng
michael@bkmbio.com