A sejttenyészet alapfeltételei
1. Megfelelő sejttenyészet közeg
A megfelelő sejttenyészet közeg az egyik legfontosabb feltétele a sejtek növekedésének és proliferációjának in vitro. A táptalaj nemcsak sejttáplálkozást és alapanyagokat biztosít a sejtek növekedésének és proliferációjának elősegítésére, hanem élő környezetet is biztosít a tenyésztett sejtek növekedéséhez és szaporodásához.
2. Kiváló minőségű szérum
Jelenleg a legtöbb szintetikus közeg szérum hozzáadását igényli. A szérum a sejttenyésztő közeg egyik legfontosabb összetevője, amely számos növekedési faktort és egyéb, a sejtnövekedéshez szükséges tápanyagokat tartalmaz.
3. Állandó sejtnövekedési hőmérséklet
A tenyésztett sejtek erőteljes növekedésének fenntartása érdekében állandó és megfelelő hőmérsékletnek kell lennie.
4. Megfelelő gázkörnyezet
A gáz az emlőssejtek túlélésének egyik szükséges feltétele, és a szükséges gázok főként oxigén és szén-dioxid.
5. Sejttenyészet hőmérséklete
A tenyésztett sejtek erőteljes növekedésének fenntartása érdekében állandó és megfelelő hőmérsékletnek kell lennie. A különböző típusú sejtek eltérő követelményeket támasztanak a tenyészet hőmérsékletével kapcsolatban. Az emberi sejttenyészet standard hőmérséklete 36,5 °C ± 0,5 °C. Az ettől a hőmérséklet-tartománytól való eltérés befolyásolja a sejtek normális anyagcseréjét, sőt meghal.
6. Megfelelő gázkörnyezet
A gáz az emlősök sejttenyészetének túléléséhez szükséges egyik feltétele, és a szükséges gázok főként oxigén és szén-dioxid. Az oxigén részt vesz a trikarbonsav-ciklusban, energiát termel a sejtek növekedéséhez és proliferációjához, valamint szintetizálja a sejtek növekedéséhez szükséges különböző komponenseket.
A sejttenyészet gyakori szennyeződése
1. Bakteriális szennyeződés
A bakteriális szennyeződés a leggyakoribb. Ha a művelet kissé nem megfelelő, sejtszennyeződést okoz. Bakteriális szennyeződés után fekete vékony homokcsíkokként jelenik meg, amikor a mikroszkóp alatt megfigyelik. Rúd alakú, stb. Másodszor, a táptalaj sárgára és zavarossá válik, és a finom homok alakú üledékek jól láthatóak a petri-csészében, és időről időre furcsa szag van.
2. Gombás szennyeződés
A gombaszennyezett tenyészetoldat tiszta és átlátszó, nem olyan, mint egy nagy bakteriális fertőzés kitörése, ezért nehéz korán kimutatni. Néha úgy néz ki, mint egy szál a mikroszkóp alatt, néha úgy néz ki, mint egy korall, és lassan egy nagyon vékony fekete szál nő. Ez Ha már túl késő, a sejteket nehéz megmenteni.
3. Penész szennyeződés
A gombás fertőzésekkel összhangban, mivel a táptalaj tiszta, a gombás szennyeződést nehéz korán kimutatni, amikor gyakran túl késő. A táptalajban lassan megjelentek a flokkuláns szennyeződések, és a mikroszkóp alatt fonalas tömegű lebegő tárgyak voltak láthatók, mint a szélben lévő catkins. A sejtek még mindig növekedhetnek, de idővel a sejtek romlanak és megállnak.
4. Mikoplazma fertőzés
A táptalaj zavarossá válik. Miután a mikoplazma megfertőzte a sejteket, a citopátiás változások nem nyilvánvalóak, de a sejtállapot rosszabbodik és a növekedés lelassul. Lehet, hogy a mikroszkóp alatt kis fekete foltok vannak, de a táptalaj általában nem zavaros. A sejtek áthaladása után intercelluláris fekete foltok jelentek meg, a sejtek vakuolálódtak, és sok sejt hasonlított az apoptózisra és a nekrózisra. Végül a sejtek lebegtek és teljesen elpusztultak.
Sejtszennyeződés megelőzése
A jó szabályok és előírások létrehozása nagyban hozzájárulhat a sejtek szennyeződésének csökkentéséhez. Beleértve a hozzáférési rendszert, az üzemeltetési normákat és a napi irányítási rendszert.
Hozzáférési rendszer: beleértve a személyzetet és az anyagokat. A személyzetet ki kell képezni, mielőtt önállóan működhetnének, és a laboratóriumba való belépés előtt meg kell felelniük a viselési követelményeknek, például fehér kabátoknak, izolációs ruháknak, maszkoknak, kesztyűknek stb. A szükséges termékek esetében a nem eldobható tárgyakat szigorúan sterilizálni és sterilizálni kell, és a megvásárolt tárgyakat rendszeres és megbízható csatornákból kell megvásárolni. Az újonnan vásárolt cellákat használat előtt tesztelni és ellenőrizni kell.
Üzemeltetési előírások: A legjobb, ha specifikációkat fogalmaz meg a rutinműveletekre, és a laboratóriumi személyzetnek be kell tartania az üzemeltetési előírásokat, amelyeket nem lehet tetszés szerint megváltoztatni, és ápolnia kell a laboratóriumi személyzet jó működési szokásait is. Például, miután a pipetta hegyét beszívta, másodszor nem nyúlik ki a közegbe, és egyszer elegendő mennyiségű közeget szívnak be. Folyadék hozzáadásakor a folyadékot a lehető legnagyobb mértékben szuszpenzióba kell adni, ami hatékonyan megakadályozhatja a mikoplazma szennyeződését és a sejtek keresztszennyeződését. Ezenkívül, ha lehetséges, egyszerre csak egy cellavonalat működtessen, és jobb, ha van egy kis időintervallum a sejtek között a keresztszennyeződés elkerülése érdekében.
Napi irányítási rendszer: Szabályokat és módszereket tartalmaz a környezet, valamint a fogyóeszközök, reagensek stb. használatára, tisztítására és karbantartására vonatkozóan. A reagensek és fogyóeszközök fogyasztását, leltározását és beszerzését is kezelik, beleértve a sejtminták kétszintű készletgazdálkodását is. A nem könnyű megtalálni kívánt szennyeződési források esetében a legjobb, ha rendszeres vizsgálatokat végeznek, főként mikoplazma szennyeződést és sejtkeresztszennyeződést.
A BKMAM Bio megfelelő fogyóeszközöket biztosít a sejttenyészethez:
Eldobható műanyag kerek/négyzet alakú petri tálalók:
Nagy átlátszóságú polisztirol anyag (PS);
A felület sima és sík, és mikroszkópos megfigyelés alatt a sejtek optikai torzulása nem lehetséges;
A rakodó kialakítás megkönnyíti az egymásra rakást és a tárolást;
Etilén-oxid sterilizálás (EO);
Kopás és korrózióállóság.
A sejttenyészetes ételek tapadó kezelése:
polisztirol anyag (PS);
Elektronsugaras sterilizálás, nincs pirogén, nincs toxin;
Vákuum plazma felületkezelés, kiváló sejttapadás;
A felület sima és sík, és mikroszkópos megfigyelés alatt a sejtek optikai torzulása nem lehetséges;
Az egymásra rakható kialakítás megkönnyíti az egymásra rakást és a tárolást.
Műanyag sejttenyésztő lemezek:
polisztirol anyag (PS);
Alkalmas normál sejttenyészethez, nem tapadó kezelési lemez típushoz;
Nincs pirogén, nincs toxin, sterilizálva;
Könnyen szakadási típusú független csomagolás, könnyen kezelhető;
A sejttenyésztő lemezek tapadó kezelése:
polisztirol anyag (PS);
Tapadó kezelés (TC kezelés) lemeztípus, amely tapadó sejtek tenyésztésére alkalmas;
Nincs pirogén, nincs toxin, sterilizálva;
Könnyen szakadási típusú független csomagolás, könnyen kezelhető;
Mindegyik lapos fenék.
A sejttenyészetes lombikok tapadó kezelése:
polisztirol anyag (PS);
Elektronsugaras sterilizálás, nincs pirogén, nincs toxin;
Vákuum plazma felületkezelés, kiváló sejttapadás;
Lélegző fedél, amely elősegíti a gázcserét és megakadályozza a mikroorganizmusok átjutását.
Belső/külső spin krioviálok:
100%, tisztaságú polipropilén anyag (PP);
Ellenáll a 15psi, 121°C sterilizálásnak;
A csőfal megvastagodott, és a cső teste méretarányos és írói területtel rendelkezik;
A csőfedél menete és a csőtest között szilikon gyűrűs tömítés van a tömítettség biztosítása érdekében;
Nincs DNáz, nincs RNáz, nincs pirogén, nincs endotoxin.
