A sejtekkel kapcsolatos kísérleteket végző barátoknak gyakran sejtfagyasztási módszereket kell alkalmazniuk. Röviden, a cellás fagyasztott tárolás célja a sejtek alacsony hőmérsékletű környezetben való mentése a hosszú távú megőrzés céljának elérése érdekében. A sejtek bizonyos fokú mutációt mutatnak az átviteli folyamat során. Annak érdekében, hogy a sejtek továbbra is használhatók legyenek sejtszennyezés és -mutáció esetén, néhány sejtet általában fagyasztásra használnak.
A sejt megfagyott elve
A sejtek lefagyasztásának és helyreállításának egyik alapelve a "lassú fagyasztott fúzió", hogy a sejtek életerejét maximálisan megmentsék. Egyszerűen fogalmazva: fagyáskor és hűtéskor lassúnak kell lennie, alacsony hőmérsékletről pedig gyorsan fel kell melegíteni. A lassú fagyás oka, hogy ha a sejteket közvetlenül ultraalacsony hőmérsékletű környezetbe, például folyékony nitrogénbe helyezik, a sejtek nagy jégkristályt képeznek, ami károsítja a sejteket.
Ha lassan fagyasztja le, a sejtek lassan kiszáradhatnak, hogy elérjék a sejtvédelmi célt. Ezen túlmenően a visszanyerés során azt is meg kell akadályozni, hogy kis jégkristályokból nagy jégkristályok, azaz jégkristályok nehéz kristályai képződjenek. Ezért, amikor általában mindenki sejtfagyasztást végez, az mindig veszteséget okoz a sejteknek, ami valószínűleg hatással lesz a lefagyás lépésére.
A sejtfagyasztás számos módja
Kézi módszer: A lefagyasztott sejteket általában folyékony nitrogénben tárolják. A kézi üzemmód a gradiens lehűtése a hűtőszekrényben. Mentse el a cellákat a fagyasztott tároló csőben, és helyezze őket 4 °C, -20 °C, -80 °C hőmérsékletű hűtőszekrénybe. 24 órán át fagyasztva -80 C fokon, mielőtt folyékony nitrogénbe tesszük. A kézi hűtés nem igényel további fogyóeszközöket. Manuálisan működtethető. Ez a legegyszerűbb, de nem egyszerű. A tényleges működés zavaró. A hatás pedig nem túl jó, mert ez a hűtési módszer még mindig nem egységes, és nem feltétlenül alkalmazható sérülékenyebb sejteknél.
Gradiens hűtődoboz: A piacon értékesített gradiens hűtődobozt kifejezetten a fagyasztási folyamat egyenletes hűtésére használják. A hűtési sebesség általában -1 fok/perc. Helyezze a fagyasztott tároló csövet a gradiens hűtődobozba, és helyezze a gradiens hűtődobozt közvetlenül a hűtőszekrény -80 C fokos környezetébe, hogy kézi gradiens üzemmód nélkül töltse az éjszakát. Ezután engedje le a lerakócsövet, és tegye folyékony nitrogénbe. A gradiens hűtődobozok alkalmazása jobb, mert a piacon lévő kereskedelmi hűtődobozok nagyjából egyenletes hűtési sebességet tudnak biztosítani.
Két gyakori gradiens hűtődoboz van a piacon. Izopropil hozzáadása szükséges, általában PC doboztest. Használatkor adjon izopenolt a dobozban lévő vízkőleválasztó vonalhoz, amikor azt használja. Az izopropanolt hordozóként használják a hő tárolására és elosztására.
Egy másik fajta nem kell hozzá izopropil, habzás, és a fagyasztó közvetlenül a használat során elhelyezhető, így kényelmesebb a kezelés.
Az izopropanol hűtődoboz többszöri használat után javasolt a folyadék cseréje, de mivel az izopropanol káros folyadék, amely károsítja a kísérleteket és a környezetet, ezért általában többször is használható. Azonban biztosítani kell, hogy a folyadék egy bizonyos mennyiségben legyen.
Nem programozott fagyasztott tárolás: Használjon nem programozott fagyasztott folyadékokat, amelyek a piacon megvásárolhatók. A hagyományos fagyasztott folyadékkal összehasonlítva a belső komponens csökkentheti a jégkristály sejtjeinek károsodását, így nem kell a gradienst használni a hűtéshez, és nincs szükség a gradiens hűtődobozra sem. A fagyasztott tároló közvetlenül -80 C fokos hűtőszekrénybe helyezhető.
Sok sejtminta nagyon értékes. Kísérletek végzésekor rajtunk kívül is használnunk kell. A kapcsolódó termékválasztásban is a lehető legnagyobb mértékben jó termékeket kell választania. Válassza ki a minősített minőségű fagyasztott tároló csövet, próbálja meg a gradiens hűtőeszközt használni a fagyasztáshoz, és maximalizálja a minimális sejtkárosodás garanciáját, hogy elkerülje a kisebb veszteségeket.